圆二色光谱（CD）基于手性物质对左右圆偏振光的差异性吸收原理。当平面偏振光通过手性样品时，左右旋圆偏振光被吸收的程度不同，导致偏振面旋转形成椭圆偏振光，通过测量椭圆度（单位为mdeg）获得光谱。该技术主要用于解析蛋白质二级结构、核酸构象及手性分子绝对构型，检测能力如下：
检测能力 | 范围说明 |
|---|---|
波长范围 | 170–900 nm |
光谱分辨率 | ≤0.1 nm |
温度控制范围 | -20°C至150°C（需温控附件） |
样品形态支持 | 溶液/薄膜/固体（需特殊制样） |
最低检测限 | 0.1 mg/mL（蛋白质溶液） |
构象分析能力 | α-螺旋/β-折叠/无规卷曲定量解析 |
材料类型 | 送样要求 |
|---|---|
蛋白质溶液 | 浓度0.1-1 mg/mL，体积≥0.5 mL；缓冲液pH 3-10，盐浓度<100 mM |
核酸溶液 | 浓度>0.2 mg/mL，注明序列/纯度；避免重金属污染 |
有机小分子 | 溶解于透明溶剂（如乙腈/水），浓度10⁻⁴–10⁻³ M，注明手性中心位置 |
薄膜样品 | 厚度≤0.1 mm，尺寸≥1×1 cm；附基底材质说明（如石英/硅片） |
固体粉末 | 需KBr压片或溶解后测试；若直接测试，提供≥10 mg均匀粉末 |
溶液样品：离心（12,000 rpm, 10 min）去除杂质，注入石英比色皿（光程0.1/1 cm）
固体样品：粉末采用KBr压片法；薄膜固定于专用支架
波长范围：190–260 nm（蛋白质）/ 200–300 nm（核酸）
扫描速度：50 nm/min
温度：25°C（默认）或指定温度（需控温池）
累计次数：3次（提升信噪比）
扣除溶剂背景谱图
平滑处理（Savitzky-Golay算法）
单位转换：椭圆度→摩尔椭圆度（Δε）
分析：CDPro软件拟合二级结构比例
信号强度不足 原因：浓度过低或光程过短 解决方案：提高浓度至0.5 mg/mL或改用1 cm比色皿
基线漂移 原因：比色皿污染或温度波动 解决方案：超声清洗比色皿，启用温控模块
异常吸收峰 原因：溶剂杂质（如Tris缓冲液在<210 nm有强吸收） 解决方案：更换为磷酸盐缓冲液或超纯水
二级结构拟合偏差 原因：样品聚集或未扣除背景 解决方案：离心过滤后重新测试，严格匹配溶剂背景